לוקליזציה פרוספקטיבית של מוטציות ויראליות הבורחות מנוגדנים המשמשים לטיפול ב-COVID-19

מספר נוגדנים כבר נמצאים בשימוש או בפיתוח כטיפולים לטיפול ב-COVID-19.עם הופעתן של גרסאות חדשות של תסמונת נשימתית חריפה נגיף קורונה 2 (SARS-CoV-2), חשוב לחזות אם הם עדיין יהיו רגישים לטיפול נוגדנים.סטאר וחב'.נעשה שימוש בספריית שמרים המכסה את כל המוטציות בתחום הקישור לקולטן SARS-CoV-2 שלא ישבשו מאוד את הקישור לקולטן המארח (ACE2), ומפה כיצד מוטציות אלו משפיעות על שלושת ה-Anti-SARS-CoV העיקריים. -2 קשירת נוגדנים.דמויות אלו מזהות מוטציות הבורחות מקשירת נוגדנים, כולל מוטציות בודדות הבורחות משני הנוגדנים בתמהיל הנוגדנים של Regeneron.מוטציות רבות הבורחות מנוגדן בודד מתפשטות בבני אדם.
נוגדנים הם טיפול פוטנציאלי לטיפול בתסמונת נשימתית חריפה נגיף קורונה 2 (SARS-CoV-2), אך לא ברור שהנגיף מתפתח כדי להימלט מהסיכון שלהם.כאן אנו ממפים את האופן שבו כל המוטציות בתחום המקשר לקולטן SARS-CoV-2 (RBD) משפיעות על הקישור של קוקטייל REGN-COV2 לנוגדן LY-CoV016.המפות המלאות הללו חשפו מוטציה של חומצת אמינו שחמקה לחלוטין מתערובת REGN-COV2, המורכבת משני נוגדנים REGN10933 ו-REGN10987 המכוונים לאפיטופים מבניים שונים.נתונים אלה גם מזהים מוטציות וירוסים שנבחרו בחולים נגועים מתמשכים שטופלו ב-REGN-COV2 ובמהלך בחירת בריחת וירוס במבחנה.לבסוף, נתונים אלה חושפים שמוטציות הבורחות מנוגדן בודד כבר קיימות בזני SARS-CoV-2 במחזור.מפות בריחה מלאות אלו יכולות להסביר את ההשלכות של מוטציות שנצפו במהלך מעקב וירוסים.
נוגדנים מפותחים לטיפול בתסמונת נשימתית חריפה חמורה וירוס קורונה 2 (SARS-CoV-2) (1).נוגדנים נגד וירוסים מסוימים אחרים יכולים להפוך ללא יעילים על ידי מוטציות וירוסים שנבחרו במהלך הטיפול בחולים נגועים (2, 3) או מוטציות ויראליות שהתפשטו ברחבי העולם כדי להקנות עמידות לכל הנגיף.לכן, קביעה אילו מוטציות של SARS-CoV-2 יכולות להימלט מנוגדנים מרכזיים היא קריטית כדי להעריך כיצד מוטציות שנצפו במהלך מעקב נגיפים משפיעות על יעילות הטיפול בנוגדנים.
רוב הנוגדנים המובילים נגד SARS-CoV-2 מכוונים לתחום קושר הקולטן הנגיפי (RBD), המתווך קישור לאנזים הממיר אנגיוטנסין 2 (ACE2) (5, 6).לאחרונה, פיתחנו שיטת סריקת מוטציות עמוקה כדי למפות כיצד כל המוטציות של RBD משפיעות על תפקודו ועל זיהויו על ידי נוגדנים אנטי-ויראליים (7, 8).השיטה כוללת יצירת ספרייה של מוטנטי RBD, ביטוים על פני השמרים, ושימוש במיון תאים מופעלי פלואורסצנציה וברצף עמוק כדי לכמת כיצד כל מוטציה משפיעה על קיפול RBD, זיקה ל-ACE2 (נמדדת בסדרת טיטרציה), וקשירת נוגדנים. (איור S1A).במחקר זה, השתמשנו בספריית המוטציות החוזרות ונשנות המתוארות ב- (7), המורכבת מגרסאות RBD עם ברקוד, המכסה 3804 מתוך 3819 המוטציות האפשריות של חומצות אמינו.הספרייה שלנו הוכנה מהרקע הגנטי של RBD של הבידוד המוקדם Wuhan-Hu-1.למרות שהתדירות של מספר מוטנטים עולה, הם עדיין מייצגים את רצפי ה-RBD הנפוצים ביותר (9, 10).שרטטנו שתיים מתוך 2034 מוטציות שאינן משבשות מאוד את קיפול ה-RBD וקשירת ACE (7) כיצד להעביר את קוקטייל REGN-COV2 (REGN10933 ו-REGN10987) (11, 12) ואת ה-LY-CoV016 של אלי לילי הצורה הרקומביננטית של נוגדן משפיע על שיטת הקישור של נוגדן (נקרא גם CB6 או JS016) (13) (איור S1B).REGN-COV2 קיבל לאחרונה אישור לשימוש חירום עבור COVID-19 (14), בעוד ש-LY-CoV016 עובר כעת ניסויים קליניים שלב 3 (15).
[Glu406→Trp(E406W)] נמלט מאוד מהתערובת של שני נוגדנים (איור 1A).מפת הבריחה של LY-CoV016 חשפה גם מוטציות בריחה רבות באתרים שונים ב-RBD (איור 1B).למרות שחלק ממוטציות בריחה עלולות לפגוע ביכולת של RBD להיקשר ל-ACE2 או להתבטא בצורה מקופלת כהלכה, על פי מדידות קודמות של סריקת מוטציות עמוקות באמצעות RBD המוצג בשמרים, למוטציות תפקודיות רבות יש השפעה מועטה או לא על תכונות תפקודיות אלו (7 ) (איור 1, A ו-B מייצגים את אובדן הזיקה ל-ACE2, בעוד שאיור S2 מייצג את הירידה בביטוי RBD.
(א) מיפוי הנוגדן ב- REGN-COV2.גרף הקו משמאל מציג את הבריחה בכל אתר ב-RBD (סכום כל המוטציות בכל אתר).תמונת הלוגו מימין מציגה את מיקום המילוט החזק (קו תחתון סגול).הגובה של כל אות הוא פרופורציונלי לעוצמת הבריחה המתווכת על ידי המוטציה של חומצת האמינו, ו"ציון בריחה" של 1 לכל מוטציה מתאים לבריחה מלאה.קנה המידה של ציר ה-y שונה עבור כל שורה, כך, למשל, E406W בורח מכל נוגדני REGN, אך הוא ברור ביותר עבור קוקטיילים מכיוון שהוא מוצף על ידי אתרי הבריחה האחרים של נוגדנים בודדים.עבור הגרסה הניתנת להרחבה, S2, A ו-B משמשים לצביעת המפה לפי האופן שבו מוטציות משפיעות על הביטוי של RBD מקופל.S2, C ו-D משמשים להפצת ההשפעה על זיקה ACE2 וביטוי RBD בין כל המוטציות שנצפו בבידוד וירוסים במחזור.(ב) כפי שמוצג ב-(א), צייר את LY-CoV016.(ג) השתמש בחלקיקי lentiviral עם ספייק פסאודו-טיפוס כדי לאמת מוטציות מפתח במבחן הנטרול.בחרנו לאמת את המוטציות שצפויות להיות בעלות השפעה גדולה יותר או קיימות בתדירות גבוהה במבודדים של SARS-CoV-2 (כגון N439K) במחזור.כל נקודה מייצגת את העלייה הכפולה של הריכוז המעכב החציוני (IC50) של המוטציה ביחס לשיא של סוג הבר ללא מוטציה (WT) המכיל D614G.הקו המקווקו הכחול 1 מייצג אפקט נטרול הדומה ל-WT, וערך> 1 מייצג התנגדות נטרול מוגברת.צבע הנקודה מציין אם ברצונך לברוח מהמפה.הנקודות מצביעות על כך שמכיוון שה-IC50 נמצא מחוץ לסדרת הדילול בשימוש, השינוי המרובה נבדק (גבול עליון או תחתון).רוב המוטנטים נבדקים בכפולות, אז יש שתי נקודות.עקומת הנטרול המלאה מוצגת באיור 2. S3.הקיצורים בני אות אחת של שיירי חומצות אמינו הם כדלקמן: A, Ala;ג, ציסטאין;ד,אספ;ה, גלו;ו, פ;ג,גלי;ח, שלו;אני, איל;ק, ליזין;ל, ליו;מטרופולין נ, אסן;פ, פרו;ש, גלן;ר,ארג;ס,סר;T, Thr;ו, ואל;W, טריפטופן;וי, טיר.
על מנת לאמת את ההשפעה האנטיגנית של מוטציות מפתח, ביצענו מבחן נטרול באמצעות חלקיקים לנטיו-ויראליים פסאודוטיפיים של פאניקה, ומצאנו שיש עקביות בין מפת הבריחה של קושרת הנוגדנים לבין מבחן הנטרול (איור 1C ואיור S3).כצפוי ממפת הנוגדנים REGN-COV2, המוטציה בעמדה 486 מנוטרלת רק על ידי REGN10933, בעוד שהמוטציה בעמדות 439 ו-444 מנוטרלת רק על ידי REGN10987, כך שהמוטציות הללו אינן יכולות לברוח.אבל E406W נמלט משני הנוגדנים REGN-COV2, כך שהוא גם נמלט מהתערובת בחוזקה.באמצעות ניתוח מבני ובחירת בריחה של וירוסים, רג'נרון מאמין ששום מוטציה של חומצות אמינו לא יכולה להימלט משני הנוגדנים בקוקטייל (11, 12), אבל המפה המלאה שלנו מזהה את E406W כמוטציית בריחה מקוקטייל.E406W משפיע על הנוגדן REGN-COV2 בצורה ספציפית יחסית, ואינו מפריע ברצינות לתפקוד של RBD, מכיוון שהוא מפחית רק במעט את השפעת הנטרול של LY-CoV016 (איור 1C) ואת הטיטר של חלקיקים פסאודוטיפוסים עדניים עם ספיקים (איור S3F).
על מנת לבחון האם מפת הבריחה שלנו עולה בקנה אחד עם האבולוציה של וירוסים בבחירת נוגדנים, בדקנו תחילה את הנתונים של ניסוי הבריחה של וירוס Regeneron, שבו ספייק הביטוי גדל בתרבית תאים בנוכחות כל REGN10933 The vesicular וירוס stomatitis (VSV), REGN10987 או קוקטייל REGN-COV2 (12).עבודה זו זיהתה חמש מוטציות בריחה מ- REGN10933, שתי מוטציות בריחה מ- REGN10987, וללא מוטציות מקוקטייל (איור 2A).המוטציות שנבחרו על ידי כל שבע תרביות התאים מודגשות במפת הבריחה שלנו, והשינוי החד-נוקלאוטידי של הקודון הפראי ברצף Wuhan-Hu-1 RBD נגיש גם הוא (איור 2B), מה שמצביע על ההבדל בין קונקורדנס בריחות גרף והתפתחות וירוסים בלחץ נוגדנים בתרבית תאים.ראוי לציין שלא ניתן לגשת ל-E406W על ידי שינויי נוקלאוטיד בודדים, מה שעשוי להסביר מדוע בחירת קוקטייל Regeneron אינה יכולה לזהות אותו למרות הסבילות הטובה יחסית של קיפול RBD וזיקת ​​ACE2.
(א) בנוכחות נוגדנים, Regeneron משתמש Pseudotype Panicle VSV כדי לבחור מוטציות בריחת וירוסים בתרבית תאים (12).(ב) דיאגרמת הבריחה, כפי שמוצגת באיור 1A, אך מציגה רק את המוטציות הנגישות על ידי שינוי נוקלאוטיד בודד ברצף Wuhan-Hu-1.לא אפור מצביע על מוטציות בתרבית תאים (אדום), וחולים נגועים (כחול) ), או שניהם (סגול).איור S5 מציג את הגרפים הללו, שנצבעים לפי האופן שבו מוטציות משפיעות על זיקה ל-ACE2 או על ביטוי RBD.(ג) קינטיקה של מוטציית RBD בחולים שטופלו עם REGN-COV2 ביום ה-145 לזיהום (קו אנכי מנוקד שחור).תדירות הקישור בין E484A ל-F486I עלתה, אך מכיוון ש-E484A אינה מוטציית בריחה באיור שלנו, היא אינה מוצגת בפאנלים אחרים.ראה גם איור.S4.(ד) מוטציות הבריחה המתרחשות בתרבית תאים ובמטופלים נגועים נגישות באמצעות נוקלאוטיד יחיד, והקישור של נוגדני בריחה אינו גורם לעלות משמעותית לזיקה ל-ACE2 [כפי שנמדד בשיטת תצוגת השמרים (7)].כל נקודה היא מוטציה, וצורתה וצבעה מציינים האם ניתן לגשת אליה ולבחור בה במהלך גידול הנגיף.הנקודות הימניות יותר על ציר ה-x מצביעות על בריחה חזקה יותר של קשירת נוגדנים;הנקודות הגבוהות יותר על ציר ה-y מצביעות על זיקה גבוהה יותר ל-ACE2.
על מנת לקבוע אם Escape Atlas יכול לנתח את האבולוציה של וירוסים המדביקים בני אדם, בדקנו נתוני רצף עמוקים של חולה נגוע מתמשך בדיכאון חיסוני שקיבל REGN-COV2 ביום ה-145 לאחר האבחנה של טיפול ב-COVID-19 (16).טיפול מאוחר מאפשר לאוכלוסיית הנגיפים של המטופל לצבור מגוון גנטי, שחלקו עשוי להיות מונע על ידי מתח חיסוני, מכיוון שלמטופל יש תגובת נוגדנים אוטונוטרלית חלשה לפני הטיפול (16).לאחר מתן REGN-COV2, התדירות של חמש מוטציות חומצות אמינו ב-RBD השתנתה במהירות (איור 2C ואיור S4).מפת הבריחה שלנו הראתה ששלוש מהמוטציות הללו ברחו REGN10933 ואחת ברחה REGN10987 (איור 2B).ראוי לציין כי לאחר הטיפול בנוגדנים, לא כל המוטציות הועברו לאתר הקבוע.להיפך, יש עלייה ונפילה של תחרות (איור 2C).דפוס זה נצפתה באבולוציה הפנימית של המארחים המסתגלים של וירוסים אחרים (17, 18), אולי עקב תחרות בין רכיבה חופשית גנטית לשושלות ויראליות.נראה כי שני הכוחות הללו ממלאים תפקיד בחולים עם זיהום מתמשך (איור 2C ואיור S4C): E484A (לא מוטציית בריחה בתרשים שלנו) ו-F486I (בריחה REGN10933) רכיבה חופשית לאחר טיפול, ושושלות וירוסים הנושאות N440D ו Q493K (נמלט REGN10987 ו- REGN10933, בהתאמה) התחרה תחילה עם מוטאנט הבריחה REGN10933 Y489H, ולאחר מכן התחרה עם השושלת הנושאת את E484A ו-F486I ו-Q493K.
שלוש מתוך ארבע מוטציות הבריחה בחולים שטופלו ב- REGN-COV2 לא זוהו בבחירת תרבית תאי הנגיף של Regeneron (איור 2B), מה שממחיש את היתרון של המפה השלמה.בחירת הנגיפים אינה שלמה מכיוון שהם יכולים לזהות רק מוטציות שנבחרו באקראי בניסוי התרבות התאים המסוים הזה.להיפך, המפה השלמה מפרטת את כל המוטציות, שעשויות לכלול מוטציות שנגרמו מסיבות שאינן קשורות לטיפול, אך משפיעות בטעות על קשירת נוגדנים.
כמובן, התפתחות הנגיפים מושפעת ממגבלות תפקודיות ומלחץ להתחמק מנוגדנים.המוטציות והחולים שנבחרו בתרבית תאים תמיד עומדים בקריטריונים הבאים: הם בורחים מקשירת נוגדנים, יכולים להיכנס באמצעות שינוי נוקלאוטיד בודד, ומחירם מועט או ללא עלות לאפיניות ACE2 [דרך המוטציות העמוקות הקודמות שהוצגו באמצעות מדידת סריקת שמרים RBD (7 )] (איור 2D ואיור S5).לכן, ניתן להשתמש במפה מלאה של האופן שבו מוטציות משפיעות על פנוטיפים ביוכימיים מרכזיים של RBD (כגון ACE וקשירת נוגדנים) כדי להעריך מסלולים אפשריים לאבולוציה של וירוסים.אזהרה אחת היא שבמסגרת זמן אבולוציונית ארוכה יותר, כפי שנצפתה בחסינות ויראלית ובריחה של תרופות, עקב אינטראקציות אפיסטטיות, מרחב הסובלנות למוטציות עשוי להשתנות (19-21).
המפה המלאה מאפשרת לנו להעריך את מוטציות הבריחה הקיימות ב-SARS-CoV-2 במחזור.בדקנו את כל רצפי ה-SARS-CoV-2 הזמינים שמקורם באדם החל מה-11 בינואר 2021 ומצאנו שמספר רב של מוטציות RBD ברחו מנוגדן אחד או יותר (איור 3).עם זאת, מוטציית הבריחה היחידה הקיימת ב->0.1% מהרצף היא REGN10933 מוטאנט בריחה Y453F [0.3% מהרצף;ראה (12)], REGN10987 נמלט מוטאנט N439K [1.7% מהרצף;ראה איור 1C ו-(22)], ומוטציית בריחה של LY-CoV016 K417N (רצף 0.1%; ראה גם איור 1C).Y453F קשור להתפרצויות עצמאיות הקשורות לחוות מינק בהולנד ובדנמרק (23, 24);ראוי לציין שרצף המינק עצמו מכיל לפעמים מוטציות בריחה אחרות, כגון F486L (24).N439K פופולרי מאוד באירופה, ומהווה חלק גדול מהרצף מסקוטלנד ואירלנד באירופה (22, 25).K417N קיים בשושלת B.1.351 שהתגלתה לראשונה בדרום אפריקה (10).מוטציה נוספת המעוררת דאגה נוכחית היא N501Y, הקיימת ב-B.1.351 וגם בשושלת B.1.1.7 שזוהתה במקור בבריטניה (9).המפה שלנו מראה של-N501Y אין השפעה על נוגדן REGN-COV2, אלא רק השפעה מתונה על LY-CoV016 (איור 3).
עבור כל שילוב של נוגדנים או נוגדנים, נכון ל-11 בינואר 2021, מבין 317,866 רצפי SARS-CoV-2 האיכותיים שמקורם באדם ב-GISAID (26), הקשר בין ציון הבריחה עבור כל מוטציה לבין התדירות שלה.זה מסומן.מוטציית הבריחה של קוקטייל REGN-COV2 E406W דורשת שינויים מרובים של נוקלאוטידים ברצף Wuhan-Hu-1 RBD, ואינה נצפית ברצף GISAID.מוטציות אחרות של שייר E406 (E406Q ו-E406D) נצפו עם ספירה בתדירות נמוכה, אך חומצות אמינו מוטנטיות אלו אינן מוטציות נוקלאוטיד בודדות הרחק מ-W.
כצפוי, מוטציות בריחה מתרחשות בדרך כלל בממשק נוגדן-RBD.עם זאת, מבנה לבדו אינו מספיק כדי לחזות אילו מוטציות מתווך בריחה.לדוגמה, LY-CoV016 משתמש בשרשראות הכבדות והקלות שלו כדי להיקשר לאפיטופ רחב החופף למשטח הקישור של ACE2, אך תהליך הבריחה כולל מוטציות בשאריות RBD באזור הקובע את ההשלמה של השרשרת הכבדה (איור 4A ואיור S6, E עד ז).לעומת זאת, בריחות מ- REGN10933 ו- REGN10987 התרחשו בעיקר בשאריות RBD שנערמו בממשק של שרשראות כבדות וקלות של נוגדנים (איור 4A ואיור S6, A עד D).המוטציה של E406W שברחה מתערובת REGN-COV2 התרחשה בשאריות שלא היו במגע עם אף נוגדן (איור 4, A ו-B).למרות ש-E406 קרוב יותר מבחינה מבנית ל-LY-CoV016 (איור 4B ואיור S6H), למוטציית E406W יש השפעה קטנה בהרבה על הנוגדן (איור 1, B ו-C), מה שמצביע על כך שהמנגנון המבני הספציפי לטווח ארוך הוא אנטי-REGN - נוגדן COV2 (איור S6I).לסיכום, מוטציות בשאריות RBD במגע עם נוגדנים לא תמיד מתווכות בריחה, וכמה מוטציות בריחה משמעותיות מתרחשות בשאריות שאינן במגע עם נוגדנים (איור 4B ואיור S6, D ו-G).
(א) דיאגרמת הבריחה המוקרנת על מבנה RBD הקשור לנוגדן.[REGN10933 ו-REGN10987: מסד נתונים של חלבונים (PDB) ID 6XDG (11);LY-CoV016: PDB ID 7C01 (13)].התחומים המשתנים של השרשראות הכבדות והקלות של הנוגדן מוצגים כקריקטורות כחולות, והצבע על פני ה-RBD מציין את עוצמת הבריחה המתווכת באמצעות מוטציה באתר זה (לבן מצביע על אי בריחה, ואדום מציין את החזק ביותר אתר מילוט של הנוגדן או התערובת).אתרים שאינם עוברים מוטציה פונקציונלית מופיעים באפור.(ב) עבור כל נוגדן, סווגו את האתר כמגע ישיר של נוגדנים (אטומים שאינם מימן בתוך 4Å מהנוגדן), נוגדן פרוקסימלי (4 עד 8Å) או נוגדן דיסטלי (> 8Å).כל נקודה מייצגת אתר, מחולק לבריחה (אדום) או ללא בריחה (שחור).הקו המקווקו האפור מייצג את הערך הקריטי המשמש לסיווג האתר כבריחה או לא בריחה (לפרטים, ראה חומרים ושיטות).המספרים האדומים והשחורים מציינים כמה אתרים בכל קטגוריה נמלטו או לא נמלטו.
במחקר זה, מיפינו לחלוטין את המוטציות המתחמקות משלושת הנוגדנים העיקריים נגד SARS-CoV-2.מפות אלו מצביעות על כך שהאפיון הקודם של מוטציות בריחה אינו שלם.לא זוהו מוטציות בודדות של חומצות אמינו שיכולות להימלט משני הנוגדנים בקוקטייל REGN-COV2, וגם לא זיהו את רוב החולים בזיהום מתמשך שטופלו בקוקטייל.מוּטָצִיָה.כמובן, המפה שלנו עדיין לא ענתה על השאלה הדחופה ביותר: האם SARS-CoV-2 יפתח עמידות נרחבת לנוגדנים אלו?אבל מה שבטוח הוא שזה מדאיג שלכל כך הרבה מוטציות בריחה יש השפעה מועטה על קיפול RBD או זיקה לקולטן, וכבר יש כמה מוטציות ברמה נמוכה בנגיפים במחזור.בסופו של דבר, יש צורך להמתין ולבחון אילו מוטציות SARS-CoV-2 ישדר כאשר הוא יתפשט בקרב האוכלוסייה.העבודה שלנו תסייע ל"תצפית" על ידי הסבר מיידי של ההשפעה של מוטציות המסווגות על ידי מעקב גנום ויראלי.
זהו מאמר בגישה פתוחה המופץ תחת התנאים של רישיון הייחוס של Creative Commons.המאמר מאפשר שימוש, הפצה ושכפול ללא הגבלה בכל מדיום בתנאי שהיצירה המקורית מצוטטת כהלכה.
הערה: אנו מבקשים ממך לספק את כתובת המייל שלך רק כדי שהאדם עליו אתה ממליץ לעמוד ידע שאתה רוצה שהוא יראה את המייל ושלא מדובר בספאם.לא נלכד כתובות דוא"ל.
שאלה זו משמשת כדי לבדוק אם אתה מבקר ולמנוע שליחת דואר זבל אוטומטית.
טיילר נ.סטאר, אליסון ג'יי גריני, אמין אדטיה, וויליאם וו. האנון, מאניש סי צ'ודהארי (מניש סי צ'ודהארי), אדם ס. דינג'ס (אדם ס.
המפה המלאה של מוטציות SARS-CoV-2 הבורחות מתערובת הנוגדנים החד שבטיים של Regeneron עוזרת להסביר את התפתחות הנגיף בטיפול בחולים.
טיילר נ.סטאר, אליסון ג'יי גריני, אמין אדטיה, וויליאם וו. האנון, מאניש סי צ'ודהארי (מניש סי צ'ודהארי), אדם ס. דינג'ס (אדם ס.
המפה המלאה של מוטציות SARS-CoV-2 הבורחות מתערובת הנוגדנים החד שבטיים של Regeneron עוזרת להסביר את התפתחות הנגיף בטיפול בחולים.
©2021 האגודה האמריקאית לקידום המדע.כל הזכויות שמורות.AAAS הוא שותף של HINARI, AGORA, OARE, CHORUS, CLOCKSS, CrossRef ו-COUNTER.Science ISSN 1095-9203.